从NCBI数据库中(www.ncbi.nlm.nih.gov/bdEST/index.heml)下载猕猴桃表达序列标签（expressed sequence tag，EST），利用MISA软件对其进行SSR位点查找，将符合条件的序列选出，利用 Primer3.0 Plus 软件设计引物，由北京奥科生物公司合成。

（2）基因组DNA提取

      猕猴桃基因组DNA提取采用CTAB法。春季取1年生枝条上的健康嫩叶，采用简易CTAB法提取基因组DNA，获得的DNA经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测合格后，将样品浓度调至50ng/μL保存备用。

（3）SSR-PCR分析

     SSR-PCR反应体系、SSR-PCR扩增程序参照相关试剂盒说明书进行，遗传多样性分析选用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳约5h，银染显色后干燥后统计带型并拍照。

（4）基因克隆

     抗性材料接种溃疡病菌后0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7天采回幼嫩叶片，采用提取RNA。采用Promega公司的反转录试剂盒合成cDNA。根据本项目研究获取的猕猴桃抗溃疡病分子标记设计引物，由北京奥科生物公司合成。采用PCR法克隆相关基因，按照相关试剂盒说明书进行，阳性克隆测序由北京奥科生物公司完成。

（6）抗性分子标记

    通过大量的引物扩增，引物UDK97-428在YZ310抗性品种中获得了一条116bp条带，而在感性品种无此条带。进一步用不同品种对UDK97-428-116标记进行验证，发现毛花猕猴桃、SX45872雄株、QM91136、金艳、华优、玉研132、玉研154、秦美、海沃德、翠香、金霞有UDK97-428-116条带，西选二号、红阳、玉研426、玉研101、金桃、金阳无此条带。

（7）基因克隆

    根据UDK97-428-116对应的猕猴桃EST序列设计引物，克隆获得3个抗猕猴桃溃疡病相关基因，已在GenBank登录，登录号为JQ814370，JQ814373，JQ814378，目前正在进行基因功能的研究。

    研究结论：通过采用室内离体接种、盆栽幼树活体接种和抗性基因分子标记三种鉴定方法，验证新种质材料的抗溃疡病特性，表明YZ310 为抗溃疡病砧木材料，玉研132既抗溃疡病、果实又大、品质又好，被确定为美味猕猴桃新种质。